多重组化 mIHC,隔壁实验室都在染哪些指标?(一)-技术前沿-资讯-生物在线

多重组化 mIHC,隔壁实验室都在染哪些指标?(一)

作者:Cell Signaling Technology(CST) 2018-12-01T23:37 (访问量:4978)

基于 TSA 的 mIHC 技术,能使我们对有限的样本同时检测尽可能多的指标。但 mIHC 实验中抗体配比、实验条件的优化耗时费力。本文整理了 CST 已优化好的 mIHC 实验方案。以靶点为顺序,结合靶点解读和点评,给大家介绍有哪些 CST 优化实验方案可供参考。

——作者按

通过之前的介绍,我带同学们了解到基于 TSA (酪胺信号放大) 技术的多重荧光免疫组化 mIHC,能够帮我们避免体系中多个抗体共孵育带来的干扰,大大方便实验设计;并且能够提供强大的信号放大效果。随后进一步介绍了优化 mIHC 实验的方法,以及一些能帮助更好更快完成实验的一些标准和技巧。

是不是草船和东风都已具备,跃跃欲试的同学们早就迫不及待的撸起袖子干了起来。不少同学做的过程中就发现,其实优化出条件合适的 mIHC 的 Panel 是要花很多功夫的。那么有没有什么简单的方法让小伙伴儿们能快点出 Data 呢?

当!然!有!下面我就带大家盘点一下,任劳任怨的 CST 老(ke)黄(xue)牛(jia)们为大家耕耘好的成果——已经优化好的实验方案(Panel)。如果你正是要用 mIHC 染这些指标,赶紧藏好偷着做吧,别让隔壁组抢发了 Paper !

分别介绍以下已经优化过 mIHC Panel 的靶标:

· Cytokeratin - 细胞角蛋白:上皮细胞源肿瘤标志物

· CD8α– CD8 抗原的活性亚基:效应 T 细胞标志物

· PD-L1:免疫检查点明星配体

· PD-1:免疫检查点明星受体

· B7-H4:免疫检查点配体

· B7-H3:免疫检查点配体

· TIM-3:免疫检查点受体

· LAG3:免疫检查点受体

· CD68:单核细胞/巨噬细胞标志物

· FoxP3: Treg(调节性 T) 细胞标志物

· Arginase-1:MDSC 通过影响环境代谢物参与免疫抑制的关键酶

· HER2:乳腺癌标志物

· 肿瘤标志物:ALK、AR、EGFR、Her-3、Met、PSA、PSMA、ROS1

· T 细胞标志物:CD3e

· 免疫检查点配体:PD-L2

· 免疫检查点受体及配体:VISTA

Cytokeratin - 细胞角蛋白:上皮细胞源肿瘤标志物

细胞角蛋白是主要在上皮细胞表达的中间丝蛋白(一种细胞骨架)。角蛋白表达的组织和分化特异性很高,因此被广泛作为生物标志物 [7],在研究和病理诊断中用以标识上皮细胞,及恶性上皮肿瘤(Carcinoma)。


CD8α– CD8 抗原的活性亚基:效应 T 细胞标志物

CD8 抗原是细胞表面糖蛋白,在大多数细胞毒性 T 淋巴细胞(CTL)上表达。在 T 细胞上,CD8 是 TCR(T 细胞受体)的共同受体,能和 TCR 一起识别 MHC(主要组织相容性复合体)。活性的 CD8 可以是由两个 α 组成的同二聚体,也可以是由 α 和 β 亚基组成的异二聚体。CD8α 的免疫球蛋白样结构域与 MHC I 类分子的 α3 结构域相互作用, CD8 确保 TCR -抗原相互作用的特异性,延长 T 细胞与抗原呈递细胞之间的接触,并且 α 链能募集 T 细胞活化所必需的酪氨酸激酶 Lck (#2984) [8]。


PD-L1:免疫检查点明星配体

PD-L1,即程序性细胞死亡-配体 1,又称 B7-H1 或 CD274,是调节 T 细胞活化和免疫应答的 B7 细胞表面配体家族的成员。PD-L1 能结合 T 细胞上的 PD-1 跨膜受体并抑制其活化。PD-L1 的表达主要在抗原呈递细胞、活化 T 细胞,以及胎盘、心脏和肺等组织中 [9-11]。另外,PD-L1 在黑色素瘤,卵巢癌,结肠癌,肺癌,乳腺癌和肾细胞癌也有表达 [11-13],这些肿瘤细胞中 PD-L1 上调能帮助其逃避免疫监视 [14]。


PD-1:免疫检查点明星受体

PD-1,即程序性细胞死亡 1 蛋白,又称 PDCD1 或 CD279,是调节 T 细胞活化和免疫应答的免疫受体 CD28 家族的成员 [15, 16]。PD-1 在活化 T 细胞中表达,能被其配体 PD-L1 和 PD-L2 激活 [10],进而抑制 TCR 信号传导 [17]。除 T 细胞外,活化 B 细胞和单核细胞中也会表达 PD-1 [18]。PD-1 途径在免疫耐受中起重要作用 [16],癌细胞也会利用此途径逃避免疫监视 [14]。


B7-H4:免疫检查点配体

B7-H4,又称 VTCN1,是调节 T 细胞活化和免疫应答的细胞表面配体 B7 家族的成员。B7-H4 蛋白在抗原呈递细胞和 B 细胞表达特异性表达,能抑制 T 细胞活化、增殖和细胞因子产生 [19-21]。在几类肿瘤中也发现 B7-H4 蛋白,包括卵巢癌和乳腺癌 [22]。阻断 B7-H4 功能可帮助恢复癌症患者 T 细胞功能,具有潜在的治疗价值 [23]。


B7-H3:免疫检查点配体

B7-H3,又称 CD276,是调节 T 细胞活化和免疫应答的 B7 家族细胞表面配体的成员。B7-H3 是 T 细胞应答的负调节物,能抑制 T 细胞增殖 [24]。B7-H3 主要由抗原呈递细胞,活化的 T 细胞和一些正常组织,包括胎盘和前列腺表达 [25]。在肿瘤中,包括前列腺癌,乳腺癌,结肠癌,肺癌和胃癌以及来自肿瘤相关脉管系统的内皮细胞中可见 B7-H3 的表达 [26, 27]。


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